脱落酸ELISA检测试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA),往预先包被激素脱落酸(ABA)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的激素脱落酸(ABA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
要选个合适的脱落酸ELISA检测试剂盒主要看以下几点:
1、高灵敏度
2、特异性强
3、重复性好
4、经济
5、方便
6、快速
脱落酸ELISA检测试剂盒检测程序如下:
1、建立标准曲线:设标准孔8孔,每孔中各加入样品稀释液100ul,第一孔加标准品100ul,混匀后用加样器吸出100ul,移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第六孔,最后,从第六孔中吸出100ul弃去。第七孔为空白对照,第八孔为零孔。
2、加样:待测品孔每孔各加入待测样品100ul混匀。
3、将反应板充分混匀后粘上封板纸置37摄氏度120分钟。
4、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
5、每孔(除零孔)加第一抗体工作液50ul,置37℃60分钟。
6、洗板:同前。
7、每孔(除零孔)加酶标抗体工作液100ul(两滴),将反应板置37oC60分钟。
8、洗板:同前。
9、每孔加入底物液A、B各一滴,置37摄氏度避光反应15分钟。
10、每孔加入1滴终止液混匀。
11、在450nm处测吸光值。